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负染色又称阴性染色，是由Hall发现的相对于普通染色(即正染色)而言的染色技术。其原理在于利用重金属盐包绕低电子密度的样品，增强样本四周的电子密度，造成细微结构之间的＂质量－厚度”差异，增强散射吸收反差，使样品在黑暗的背景上呈现明亮的结构。负染色液有磷钨酸、钼酸铵、印度墨汁等，其中最常用的是1～3%磷钨酸。磷钨酸负染色液适用于显示大分子、细菌、病毒、原生动物、噬菌体、细胞器、核酸大分子、蛋白质晶体及其他大分子材料等，尤其适用于较难染色的样本。染色后的样品图像呈现透明的亮光，而背景图像呈黑色。

对于大多数样品的负染，2～3%磷钨酸已经足够，5%磷钨酸可用于较难染色的样本。

• 目的样本尽量新鲜。
  
• 样品应为均匀的悬浮液，其纯度和浓度应适宜，否则无法与染色剂之间产生特异和清晰的结合反应。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 滴染法
  
  • 样品低速离心或采用其他方法浓缩样品，制成悬浮液并且使其达到一定浓度和纯度。
    
  • 将样品悬浮液直接滴于带有支持膜的载网上，静置3～5min。
    
  • 用滤纸条从液滴边缘吸去多余液体，稍干燥。
    
  • 滴加负染色液。
    
  • 吸去多余染色液，自然干燥，进行显微镜观察。
• 漂浮法
  
  • 样品低速离心或采用其他方法浓缩样品，制成悬浮液并且使其达到一定浓度和纯度。
    
  • 将带有支持膜的载网置于样品液滴上漂浮以沾取样品。
    
  • 载网置于负染色液上漂浮1～2min。
    
  • 吸去多余染色液，自然干燥，进行显微镜观察。